Kultury plwociny dały tylko gatunki hemofilne. Rzekomo podejrzewano mukowiscydozę, ale nie można było jej zdiagnozować z powodu tych niezwykłych cech i normalnych testów potu. Metody
Przedmioty
Protokół eksperymentalny został zatwierdzony przez komisje do spraw ochrony ludzi z University of Michigan i University of North Carolina i uzyskano świadomą zgodę. DNA uzyskano z leukocytów pacjenta, jej rodziny (w tym siostry dotkniętej chorobą przed jej śmiercią) i zdrowych osób. Próbki DNA od pacjentów z mukowiscydozą i ich rodzicami uzyskano ze szpitala dla chorych dzieci w Toronto
Badania fizjologiczne
Różnica potencjałów przeznosowych i odpowiedź na perfuzję leków i roztworów bez chlorków (zastąpienie glukonianem) zmierzono za pomocą ustalonej techniki.4, 5 Stopień zahamowania indukowany przez 10-4 M amiloryd, bloker kanału sodowego, został obliczony jako procentowa zmiana z linii podstawowej. Różnica potencjałów dyfuzji chlorków (wskaźnik przepuszczalności chlorków) to zmiana napięcia występująca podczas perfuzji nosa za pomocą roztworu amilorydu wolnego od chlorków. Zmiana różnicy potencjałów po dodaniu izoproterenolu 10-5 do perfuzatu jest skorelowana ze wzrostem przepuszczalności chlorków w odpowiedzi na agonistę beta; ujemna zmiana wskazuje na hiperpolaryzację.
Stopień wydzielania chlorków przez potowe acini indukowane przez cykliczne AMP określono przez pomiar szybkości tworzenia potu po śródskórnym wstrzyknięciu mieszaniny izoproterenolu, aminofiliny i atropiny. 21, 22 próbki zebrano pod olejem i zmierzono objętość w pipetach kalibracyjnych o stałym otworze. Jedenaście pacjentów z mukowiscydozą nie pociło się w odpowiedzi na ten zastrzyk.
Stężenie chlorków w potu oznaczono metodą jonoforezy pilokarpiny.7 Różnicę potencjałów potu zmierzono za pomocą szklanej elektrody wypełnionej agarem zawierającym nasycony chlorek potasu i odniesiono do elektrody podskórnej. 23, 24 Wartości dla każdego osobnika obliczono jako średnie stężenie w surowicy. pięć do dziewięciu gruczołów.
Wykrywanie mutacji przez rozszczepienie niedopasowania chemicznego
Egzon 11 genu CFTR amplifikowano z genomowego DNA przez reakcję łańcuchową polimerazy (PCR), 25 zgodnie ze standardowymi metodami. 26 Primery do PCR wybrano z flankującej sekwencji intronowej i zmodyfikowano przez dodanie enzymu restrykcyjnego BamHI. strona, jak następuje: 5 ATACGGATCCCAACTGTGGTTAAAGCAATAGTGT3 i 5 ATACGGATCCGCACAGATTCTGAGTAACCATAAT3 . Reakcje poddano 35 cyklom denaturacji w 94 ° C przez minutę, hybrydyzacji w 55 ° C przez minutę i wydłużaniu polimerazy w 72 ° C przez 2 1/2 minuty. Produkty PCR wytrącono etanolem i ponownie zawieszono w 10 .l wody. Do generowania sond, produkt PCR typu dzikiego oczyszczono z niewraż liwiającego żelu poliakrylamidowego drogą elektroelucji i wytrącania etanolem. Końcowe znakowanie fragmentu typu dzikiego przeprowadzono jak opisano, 27 i wyznakowane DNA zawieszono ponownie w końcowej objętości 20 .l.
Heterodupleksy typu dzikiego-pacjenta i homodupleksy kontrolne typu dzikiego typu typu dzikiego utworzono zgodnie z wcześniejszym opisem, 28 z następującymi modyfikacjami
[podobne: przeglądarka skierowań na leczenie uzdrowiskowe kraków, powozownia wolsztyn, levoxa cena ]
Comments are closed.
Początkowo wykonaliśmy test na alergie i nic nie wyszło
[..] Cytowany fragment: liposomalna witamina c[…]
Oprócz tego że masz problemy z tarczyca to prawdopodobnie cierpisz na tężyczkę utajona
[..] Cytowany fragment: alergia[…]
poza tym skurcze, bóle głowy, nerwowość
[..] Odniesienie w tekscie do lublin psycholog[…]
chyba przejdę się do trzeciego lekarza i zobaczymy co powie na ten temat